Тест‐система ІФА Вітамін В12 від Monocent, Inc. призначена для кількісного вимірювання вітаміну В12 в сироватці крові або плазмі людини.
Тест‐система B12 — це твердофазний імуноферментний аналіз (ІФА), заснований на принципі відкладеного конкурентного зв’язування. Лунки,
вкриті стрептавідином, інкубують з екстрагованими стандартами вітаміну B12, контролями, зразками та внутрішній фактор‐біотиновим
кон’югатом при кімнатній температурі протягом 45 хвилин.
Під час інкубації мічений біотином внутрішній фактор зв’язується з вітаміном В12 у зразку, стандарті або сироватці контролю якості. Після 45‐
хвилинної інкубації додають вітамін В12ферментний кон’югат, який конкурує з вітаміном В12 зразка, стандарту або контролю за залишкові
ділянки внутрішнього фактора протягом додаткових 30 хвилин. Потім усі незв’язані кон’югати видаляють, а лунки промивають. Далі додають
розчин реагенту ТМВ і інкубують при кімнатній температурі протягом 15 хвилин, що призводить до появи синього забарвлення. Розвиток
кольору припиняють додаванням стоп‐розчину і спектрофотометрично вимірюють поглинання при 450 нм. Стандартну криву отримують
шляхом побудови графіка залежності концентрації стандарту від поглинання. Інтенсивність кольору обернено пропорційна кількості вітаміну
В12 у зразку. Загальна тривалість процедури аналізу становить 1,5 години.
